細(xì)胞培養(yǎng)(cell culture)是指在體外模擬體內(nèi)環(huán)境(無菌、適宜溫度、酸堿度和一定營養(yǎng)條件等),使之生存、生長、繁殖并維持主要結(jié)構(gòu)和功能的一種方法。細(xì)胞培養(yǎng)也叫細(xì)胞克隆技術(shù),在生物學(xué)中的正規(guī)名詞為細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。不論對于整個生物工程技術(shù),還是其中之一的生物克隆技術(shù)來說,細(xì)胞培養(yǎng)都是一個關(guān)鍵的過程,細(xì)胞培養(yǎng)本身就是細(xì)胞的大規(guī)模克隆。細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可以由一個細(xì)胞經(jīng)過大量培養(yǎng)成為簡單的單細(xì)胞或極少分化的多細(xì)胞,這是克隆技術(shù)必要的環(huán)節(jié),而且細(xì)胞培養(yǎng)本身就是細(xì)胞的克隆。細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是細(xì)胞生物學(xué)研究方法中重要和常用技術(shù),通過細(xì)胞培養(yǎng)既可以獲得大量細(xì)胞,又可以借此研究細(xì)胞的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞的合成代謝、細(xì)胞的生長增殖等。
細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室組建的基本要求:
1、細(xì)胞培養(yǎng)是一種無菌操作技術(shù),要求工作環(huán)境和條件必須保證無微生物污染和不受其它有害因素的影響。
2、細(xì)胞培養(yǎng)室和設(shè)計原則是防止微生物污染和有害因素影響,要求工作環(huán)境清潔、空氣清新,干燥和無煙塵。
3、細(xì)胞培養(yǎng)室的設(shè)計原則一般是無菌操作區(qū)設(shè)在室內(nèi)較少走動的內(nèi)側(cè),常規(guī)操作和封閉培養(yǎng)于一室,為10萬級潔凈環(huán)境的潔凈室。而洗刷消毒工作設(shè)在潔凈室外,避免物品污染潔凈室內(nèi)環(huán)境。細(xì)胞潔凈室需要一個空調(diào)系統(tǒng)并對外界保持一定的正壓。
4、解剖實(shí)驗(yàn)室主要用于對器官組織的分離,需要有無菌操作臺、解剖顯微鏡、各種手術(shù)器材等組織細(xì)胞培養(yǎng)室除一般實(shí)驗(yàn)室的普通常規(guī)設(shè)備外,尚有一些特殊需要的設(shè)備。基本可分為兩大類:
I. 細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室常用的基本儀器設(shè)備
1.顯微鏡:倒置顯微鏡——是組織細(xì)胞培養(yǎng)室所必需的日常工作常規(guī)使用設(shè)備之一,便于掌握細(xì)胞的生長情況并觀察有無污染等。
2.培養(yǎng)箱:體外培養(yǎng)的細(xì)胞和體內(nèi)細(xì)胞一樣,需要在恒定的溫度下生存,大多數(shù)情況下,最適溫度是37℃,溫差變化一般不應(yīng)超過±0.5℃,細(xì)胞在溫度升高2℃ 時,持續(xù)數(shù)小時即不能耐受,40℃以上將很快死亡。因此需要有能控制溫度的培養(yǎng)箱,如具有較高靈敏度的恒溫培養(yǎng)箱及CO2培養(yǎng)箱。
3.干燥箱:用于細(xì)胞培養(yǎng)箱的有些器械、器皿需要烘干后才能使用,玻璃器皿等須干熱消毒。
4.水純化裝置:細(xì)胞培養(yǎng)對水的質(zhì)量要求較高,細(xì)胞培養(yǎng)以及與細(xì)胞培養(yǎng)工作相關(guān)的液體的配制用水必須事先嚴(yán)格純化處理。進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時配制各種培養(yǎng)液及試劑等均需使用三次蒸餾水:即使是用于玻璃器皿的沖洗,也應(yīng)使用二次以上蒸餾水。
5.冰箱:細(xì)胞培養(yǎng)室必須配備。
a、普通冰箱或冷藏柜——儲存培養(yǎng)液、生理鹽水等培養(yǎng)用的物品及短期保存組織標(biāo)本。
b、低溫冰箱(-20℃)——用于儲存需要冷凍保存生物活性及較長時期存放的制劑,如酶、血清等。
6.細(xì)胞冷凍儲存器:儲存器常用的是液氮容器。根據(jù)使用需要分為不同的類型及多種規(guī)格。選擇購置液氮容器時要綜合考慮容積大小,取放使用方便及液氮揮發(fā)量(經(jīng)濟(jì))三種因素。
7.離心機(jī):進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時,常規(guī)需要進(jìn)行制備細(xì)胞懸液、調(diào)整細(xì)胞密度、洗滌、收集細(xì)胞等工作,通常需要使用實(shí)驗(yàn)室離心機(jī)。一般可常規(guī)配置4000rpm的臺式離心機(jī),例如細(xì)胞沉降,使用低速離心機(jī)即可,離心力過大有時可能引起細(xì)胞的損傷。
8.天平:常用的有扭力天平、精密天平及各種電子天平。
9.消毒器:一般為高壓蒸汽滅菌鍋,直接或間接與細(xì)胞接觸的物品均需消毒滅菌處理。
10.濾器:目前細(xì)胞培養(yǎng)工作中采用的培養(yǎng)用液,包括人工合成培養(yǎng)液、血清、消化用胰酶等常含有維生素、蛋白、多肽、生長因子等物質(zhì),這些物質(zhì)在高溫或射線照射下易發(fā)生變性或失去功能,因而上述液體多采用濾過消毒以除去細(xì)菌。目前常使用的濾器有玻璃濾器和微孔濾器,各種濾器有其使用原理和特點(diǎn)。